干細(xì)胞培養(yǎng)基是維持干細(xì)胞“干性”（自我更新與多向分化能力）、保證培養(yǎng)質(zhì)量的核心要素，其使用需嚴(yán)格遵循??無菌、精準(zhǔn)、適配細(xì)胞類型??的原則。以下是覆蓋??通用要求、特殊細(xì)胞類型需求、無血清培養(yǎng)基注意事項??的全面指南，結(jié)合2025年最新臨床與科研標(biāo)準(zhǔn)整理：  

干細(xì)胞培養(yǎng)基的核心注意事項

1.??無菌操作是底線??  

所有操作（培養(yǎng)基配制、細(xì)胞接種、傳代、換液）必須在??超凈工作臺??或??生物安全柜??中進(jìn)行，使用前用75%乙醇擦拭臺面及器械。  

培養(yǎng)基、耗材（培養(yǎng)瓶、移液器吸頭）需經(jīng)??高壓滅菌??（121℃，20分鐘）或購買無菌產(chǎn)品，避免微生物污染（細(xì)菌、真菌、支原體）。  

操作人員需穿實驗服、戴手套、口罩，避免唾液、汗液污染。  

2.??培養(yǎng)基質(zhì)量控制??  

??選擇合規(guī)產(chǎn)品??：要求提供??成分清單、質(zhì)量合格證明、無菌檢測報告??（如內(nèi)毒素≤0.25EU/ml）。  

??避免反復(fù)凍融??：培養(yǎng)基中的生長因子、蛋白質(zhì)易因反復(fù)凍融失活，需??分裝成小份（1-5ml/管）??，于-20℃避光保存，使用前37℃水浴快速解凍（不超過10分鐘）。  

??檢查外觀與有效期??：使用前觀察培養(yǎng)基是否澄清（無沉淀、渾濁），顏色是否符合要求（如含酚紅的培養(yǎng)基應(yīng)為桃紅色，pH7.2-7.4）；嚴(yán)禁使用過期培養(yǎng)基（一般有效期為6-12個月，具體以產(chǎn)品說明為準(zhǔn)）。  

3.??環(huán)境參數(shù)控制??  

??溫度??：維持在??37±0.5℃??（細(xì)胞代謝最適溫度），避免溫度波動（如培養(yǎng)箱門頻繁開啟）。  

??CO?濃度??：5%CO?（維持培養(yǎng)基pH穩(wěn)定，通過HCO??緩沖系統(tǒng)），需定期校準(zhǔn)培養(yǎng)箱的CO?傳感器。  

??濕度??：保持??95%以上??（防止培養(yǎng)基蒸發(fā)，導(dǎo)致滲透壓升高），可在培養(yǎng)箱內(nèi)放置水盤。  

4.??細(xì)胞觀察與監(jiān)測??  

??每日鏡檢??：用倒置顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài)（如間充質(zhì)干細(xì)胞的梭形、成纖維狀；胚胎干細(xì)胞的圓形、克隆狀）、密度（融合度）及是否有污染（如細(xì)菌的渾濁、真菌的菌絲）。  

??活力檢測??：傳代或凍存前需檢測細(xì)胞活力，活力低的細(xì)胞會影響培養(yǎng)效果。  

??定期檢測“干性”??：通過??流式細(xì)胞術(shù)??檢測干細(xì)胞表面標(biāo)志物，確保未分化狀態(tài)。