核酸擴(kuò)增技術(shù)與支原體檢測

自1988年以PCR為代表的核酸擴(kuò)增技術(shù)問世以來，該技術(shù)已廣泛應(yīng)用于科研和臨床，但由于標(biāo)準(zhǔn)化的建立需要一定的時(shí)間，因此用于生物制藥則相對(duì)較晚。

國外已有不少藥廠將PCR或qPCR用于工業(yè)放行檢測中的支原體檢查。PCR或qPCR的靈敏度、特異性、適用性和可靠性具有達(dá)到藥典標(biāo)準(zhǔn)的潛在可能。但需要按步驟和程序開展方法驗(yàn)證。

支原體檢測方法驗(yàn)證

有研究人員指出，有些PCR檢測法，在反應(yīng)條件及引物設(shè)計(jì)上，仍需不斷改良以提高其檢測效率。曾有研究人員，用半巢式PCR檢測70份支原體污染的樣本（主要為生物制品生產(chǎn)用細(xì)胞基質(zhì)），結(jié)果只檢出60份，說明PCR要應(yīng)用于工業(yè)檢測支原體，其首要因素是要提高檢測限。

傳統(tǒng)支原體檢查方法是培養(yǎng)法和指示細(xì)胞培養(yǎng)法，并為藥典所認(rèn)可和收錄。近年來，支原體qPCR檢測在工業(yè)領(lǐng)域的應(yīng)用越來越多，但在項(xiàng)目申報(bào)前，先需要進(jìn)行方法學(xué)驗(yàn)證，依據(jù)藥典，在檢測限、特異性和耐用性方面達(dá)到要求后，才能替代傳統(tǒng)的檢查方法。

好物推薦

支原體qPCR檢測試劑盒因其操作時(shí)間短（僅需2-3小時(shí)）、靈敏度和特異性高而廣受科研人員青睞。

目前國外藥廠放行檢測（product release testing）采用的較多的是德國Minerva Biolabs(簡稱MB)公司的Venor® Gem qEP (qPCR法)和Venor® Gem Classic(常規(guī)PCR法)。Venor® Gem qEP由于無須跑膠，且能定量，因而使用更為便捷。

MB Venor® Gem qEP 試劑盒的特點(diǎn)：

1）使用靈活

* 與幾乎所有商用循環(huán)儀兼容

* 可選擇常規(guī)PCR或?qū)崟r(shí)熒光定量PCR

2）高性能

* 高耐用性、高靈敏度和高特異性（>100種支原體物種可檢測）

* 符合EP 2.6.7 / USP <71> / JP G3標(biāo)準(zhǔn)。提供內(nèi)部擴(kuò)增對(duì)照，

用于過程監(jiān)測。有產(chǎn)品驗(yàn)證報(bào)告

3）使用方便

* 預(yù)先分裝PCR mix（25個(gè)反應(yīng)），保證長期穩(wěn)定性

* 組分為凍干粉形式，使運(yùn)輸與存儲(chǔ)更簡單

* 探針檢測，結(jié)果清晰（qPCR）

可考慮的標(biāo)準(zhǔn)品需要經(jīng)過嚴(yán)格標(biāo)定。需考慮有國際聲譽(yù)和質(zhì)控報(bào)告的標(biāo)準(zhǔn)品廠家。下面介紹某廠家標(biāo)準(zhǔn)品類別如下：

配套用于過程驗(yàn)證和檢測的標(biāo)準(zhǔn)品（EP2.6.7/USP<71>/JP G3）：

* 10CFU™靈敏度標(biāo)準(zhǔn)品，包括所有EP和JP列舉的支原體物種

* 100CFU™靈敏度標(biāo)準(zhǔn)品

* 支原體和細(xì)菌基因組DNA（特異性驗(yàn)證用）

* PCR定量標(biāo)準(zhǔn)品（108拷貝DNA/管）